Учёные Сибирского федерального университета, Красноярского научного центра (КНЦ) СО РАНи новосибирского Института химической биологии и фундаментальной медицины усовершенствовали светящийся тест на клещевой энцефалит. Для этого они впервые использовали самый маленький из открытых биолюминесцентных ферментов — светящийся белок, выделенный из морского рачка Metridia longa, Одного миллиграмма такого белка может хватить для ста тысяч точных анализов по определению наличия вируса клещевого энцефалита. Результаты исследования опубликованы в журнале International Journal of Molecular Sciences.
Ранее красноярские биофизики уже разработали метку для определения вируса энцефалита на основе другого биолюминесцентного фермента, люциферазы Renilla, однако новая люцифераза по молекулярной массе в два раза меньше, чем описанная ранее метка.
Бо́льшая биолюминесцентная активность люциферазы Metridia longa позволила учёным в 1,5 раза снизить детектируемую концентрацию вируса в пробах, что увеличило точность анализа.
Люцифераза Metridia обладает ярким светом, а небольшой размер фермента обеспечивает наиболее оптимальную наработку белка с использованием технологий рекомбинантного синтеза. Технология заключается в производстве белка с использованием гена, который кодирует интересующий белок, и клеток, которые такой белок производят.
Точность разработанного теста проверяли при помощи стандартных наборов, которые используются в санэпидемслужбах для определения клещевого энцефалита. Ученые не выявили расхождений между результатами двух типов тестов.
Более того, биолюминесцентное тестирование занимало на полчаса меньше времени. Биологи также отмечают, что небольшой размер люциферазы снижает вероятность ошибок при ее производстве и дает возможность модификации для применения в других тестах.
По данным ученых, один миллиграмм созданного гибридного белка может обеспечить более 100 тыс. измерений. При этом из одного литра культуры генетически модифицированных клеток, в которых нарабатывается светящаяся молекула, исследователи получали от трех до пяти миллиграмм белка.